DNase I
DNase I (Деоксирибонуклеаза I) е ендодеоксирибонуклеаза која може да вари едноверижна или двоверижна ДНК.Препознава и ги раскинува фосфодиестерските врски за да произведе монодеоксинуклеотиди или едно-или двоверижни олигодеоксинуклеотиди со фосфатни групи на 5'-терминалот и хидроксил на 3'-терминалот.Активноста на DNase I зависи од Ca2+ и може да се активира со двовалентни метални јони како што се Mn2+ и Zn2+.5mM Ca2+ го штити ензимот од хидролиза.Во присуство на Mg2+, ензимот може по случаен избор да препознае и расцепи кое било место на која било нишка на ДНК.Во присуство на Mn2+, двојните нишки на ДНК можат истовремено да се препознаат и да се расцепат на речиси истото место за да се формираат фрагменти на ДНК со рамен крај или лепливи крајни фрагменти на ДНК со 1-2 нуклеотиди испакнати.
Својство на производот
Говедска панкреасна DNase I беше изразена во системот за изразување на квасец и прочистена.
Cкомпоненти
| Компонента | Волумен | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50 KU | |
| DNase I, без RNase | 20 μL | 200 μL | 1 мл | 10 мл |
| 10×DNase I бафер | 1 мл | 1 мл | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Транспорт и складирање
1. Стабилност на складирање: – 15℃~-25℃ за складирање;
2.Стабилност на транспортот: Транспорт под пакувања со мраз;
3. Се испорачува во: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% глицерол, pH 7,6 на 25℃.
Дефиниција на единицата
Една единица е дефинирана како количина на ензим кој целосно ќе разгради 1 μg од pBR322 ДНК за 10 минути на 37°C.
Контрола на квалитет
RNase:5 U DNase I со 1,6 μg MS2 RNA за 4 часа на 37 ℃ не дава разградување како што е утврдено со електрофореза на гел агароза.
Бактериски Ендотоксин:LAL-тест, според кинеската фармакопеја IV 2020 издание, метод за тестирање на граница на гел, општо правило (1143).Содржината на бактериски ендотоксин треба да биде ≤10 EU/mg.
Упатство за употреба
1. Подгответе го растворот за реакција во цевката без RNase според пропорциите наведени подолу:
| Компонента | Волумен |
| РНК | X μg |
| 10 × DNase I бафер | 1 μL |
| DNase I, без RNase (5U/μL) | 1 U на μg РНК |
| ddH2O | До 10 μL |
2,37 ℃ за 15 минути;
3. Додадете го прекинувачкиот пуфер за да ја запрете реакцијата и загрејте на 65℃ 10 минути за да ја инактивирате DNase I. Примерокот може директно да се користи за следниот експеримент за транскрипција.
Белешки
1.Користете 1U DNase I на μg RNA или 1U DNase I за помалку од 1μg RNA.
2. EDTA треба да се додаде до конечна концентрација од 5 mM за да се заштити РНК од разградување за време на ензимската инактивација.
