Протеиназа К (лиофилизиран прав)
Мачка бр: HC4500A
Протеиназата К е стабилна серин протеаза со широка специфичност на супстратот.Деградира многу протеини во матичната состојба дури и во присуство на детергенти.Доказите од студиите за кристална и молекуларна структура покажуваат дека ензимот припаѓа на семејството на субтилизин со каталитичка тријада на активно место (Asp39- Неговиот69- Сер224).Доминантно место на расцепување е пептидната врска во непосредна близина на карбоксилната група на алифатични и ароматични амино киселини со блокирани алфа амино групи.Најчесто се користи за неговата широкаспецифичност.
Услови за чување
2-8℃ краткорочно складирање, -25~-15℃ долгорочно складирање.Статус на сув прав -25~-15℃ со важност од 3 години;ензимскиот прав треба да се раствори во соодветен волумен.
Спецификација
| Изглед | Бел до целосно бел аморфен лиофилизиран прав |
| Активност | ≥30 U/mg |
| DNase | Никој не е откриен |
| RNase | Никој не е откриен |
Својства
| EC број | 3.4.21.64 (Рекомбинант од албумот Tritirachium) |
| Молекуларна тежина | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| Изоелектрична точка | 7.81 |
| Оптимална pH вредност | 7.0-12.0 Сл.1 |
| Оптимална температура | 65 ℃ Сл.2 |
| pH стабилност | pH 4,5-12,5 (25℃, 16h) Сл.3 |
| Термичка стабилност | Под 50 ℃ (pH 8,0, 30 мин.) Сл.4 |
| Активатори | СДС, уреа |
| Инхибитори | Диизопропил флуорофосфат;фенилметилсулфонил флуорид |
Апликации
1. Комплет за генетска дијагностика
2. Китови за екстракција на РНК и ДНК
3. Екстракција на непротеински компоненти од ткивата, деградација на протеински нечистотии, како што се ДНК вакцини и подготовка на хепарин
4. Подготовка на хромозомска ДНК со пулсна електрофореза
5. Вестерн блот
6. Ензимски гликолизирани албумински реагенси ин витро дијагноза
Мерки на претпазливост
Носете заштитни ракавици и очила кога користите или тежите и чувајте добро проветрено по употреба.Овој производ може да предизвика алергиска реакција на кожата и сериозна иритација на очите.Ако се вдиши, може да предизвика алергија или симптоми на астма или диспнеа.Може да предизвика иритација на дишните патишта.
Анализа
Дефиниција на единица
Една единица (U) е дефинирана како количина на ензим што е потребен за хидролизирање на казеинот за да се произведе 1 μmol тирозин во минута под следните услови.
Подготовка на реагенси
Реагенс I: 1 g млечен казеин беше растворен во 50 ml од 0,1 M раствор на натриум фосфат (pH 8,0), инкубиран во 65-70 ℃ вода 15 минути, измешан и растворен, ладен со вода, прилагоден со натриум хидроксид на pH 8,0 и фиксиран волумен. 100мл.
Реагенс II: 0.1M трихлороцетна киселина, 0.2M натриум ацетат, 0.3M оцетна киселина.
Реагенс III: 0,4M Na2CO3решение.
Реагенс IV: Реагенс форинта разреден со чиста вода 5 пати.
Реагенс V: ензимски разредувач: 0,1 М раствор на натриум фосфат (pH 8,0).
Реагенс VI: раствор на тирозин: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml тирозин растворен со 0,2M HCL.
Постапка
1. 0,5 ml од реагенсот I е претходно загреан до 37℃, се додава 0,5 ml ензимски раствор, се меша добро и се инкубираат на 37℃ 10 минути.
2. Додадете 1 ml реагенс II за да ја прекинете реакцијата, добро измешајте и продолжете со инкубацијата 30 минути.
3. Центрифугирајте го растворот за реакција.
4. Земете 0,5 ml супернатант, додадете 2,5 ml реагенс III, 0,5 ml реагенс IV, добро измешајте и инкубирајте на 37℃ 30 минути.
5. ОД660е утврдена како ОД1;празна контролна група: 0,5 ml реагенс V се користи за замена на ензимскиот раствор за одредување на OD660како ОД2, ΔOD=OD1-ОД2.
6. Стандардна крива на L-тирозин: 0,5 мл различна концентрација L раствор на тирозин, 2,5 мл реагенс III, 0,5 мл реагенс IV во цевче со центрифуга од 5 мл, инкубирајте во 37 ℃ 30 минути, откријте за OD660за различна концентрација на L-тирозин, потоа се добива стандардната крива Y=kX+b, каде што Y е концентрацијата на L-тирозин, X е OD600.
Пресметка
2: Вкупен волумен на реакциониот раствор (mL)
0,5: Волумен на ензимски раствор (mL)
0,5: Реакционен волумен на течност што се користи при хромогено определување (mL)
10: Време на реакција (мин.)
Df: Повеќекратно разредување
C: Концентрација на ензими (mg/mL)
Референци
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Биофис.Рез.Commun.(1971);44:513.
3. Хилц, Х.et al.,Евра.J. Biochem.(1975);56:103-108.
4. Сембрук Јet ал., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor (1989).
Сл. 2 Оптимална температура
Реакција во 20 mM К-фосфат пуфер pH 8,0.Концентрација на ензим: 1mg/mL
Сл. 3 pH вредност Стабилност
25℃, 16 часа третман со 50mM пуфер раствор: pH 4,5-5,5, ацетат;pH 6,0-8,0, Na-фосфат;pH 8,0-9,0, трис-HCL.pH 9,0-12,5, Глицин-NaOH.Концентрација на ензим: 1mg/mL
Сл. 4 Термички стабилност
30 мин-третман со 50mM Tris-HCL пуфер, pH 8,0.Концентрација на ензим: 1mg/mL
Сл. 5 Складирање стабилниty at 25 ℃
