Протеиназа K NGS (во прав)

Спецификација

Својства

Дефиниција на единица

Една единица NGS протеаза К е дефинирана како количина на ензим потребна за хидролизирање на казеинот во 1 μmol L-тирозин под стандардни услови на определување.

 Подготовка на реагенси

Реагенс I:

Подлога: 1% казеин од раствор од говедско млеко: растворете 1 g казеин од говедско млеко во 50 ml 0,1 M раствор на натриум фосфат, pH 8,0, загрејте го во водена бања на 65-70 °C 15 минути, промешајте и растворете, изладете со вода, приспособено со натриум хидроксид до pH 8,0 и разредете до 100 ml.

Реагенс II:

Раствор на TCA: 0,1M трихлороцетна киселина, 0,2M натриум ацетат и 0,3M оцетна киселина (измерете 1,64 g трихлороцетна киселина + 1,64 g натриум ацетат + 1,724 ml оцетна киселина последователно, додадете 50 ml дејонизирана вода, наместете ја со pH 4 за да се разреди HCl0. 100 ml).

Реагенс III:

0,4 m раствор на натриум карбонат (тежи 4,24 g безводен натриум карбонат и растворете во 100 mL вода)

Реагенс IV:

Реагенс за фолин фенол: разредете 5 пати со дејонизирана вода.

Реагенс V:

Ензимски разредувач: 0,1 М раствор на натриум фосфат, pH 8,0.

Реагенс VI:

Стандарден раствор на L-тирозин: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml L-тирозин растворен со 0,2M HCl.

Постапка

1. Вклучете го спектрофотометарот UV-Vis и изберете фотометриско мерење.

2. Поставете ја брановата должина на 660 nm.

3. Вклучете ја водената бања, поставете ја температурата на 37℃, проверете ја температурата непроменета 3-5 мин.

4. Загрејте 0,5 мл супстрат во цевче со центрифуга од 2 мл на водена бања 37 ℃ 10 минути.

5. Екстрактирајте 0,5 ml разреден ензимски раствор во претходно загреаната цевка со центрифуга 10 минути.Поставете го ензимскиот разредувач како празна група.

6. Додадете 1,0 mL TCA реагенс веднаш по реакцијата.Добро измешајте и инкубирајте во водена бања 30 минути.