Комплет за генотипирање на глувчето

Бр. мачка: HCR2021A

Овој производ е комплет дизајниран за брза идентификација на генотипови на глувци, вклучително и екстракција на ДНК и систем за засилување со PCR.Производот може да се користи за PCR засилување директно од опашката на глувчето, увото, палецот и другите ткива по едноставно расцепување со Lysis Buffer и Proteinase k.Нема варење преку ноќ, екстракција на фенол-хлороформ или прочистување на колоната, што е едноставно и го скратува времето кое одзема време на експериментите.Производот е погоден за засилување на целните фрагменти до 2 kb и мултиплекс PCR реакции со до 3 пара прајмери.2×Mouse Tissue Direct PCR Mix содржи генетски модифицирана ДНК полимераза, Mg²⁺, dNTP и оптимизиран тампон систем за да се обезбеди висока ефикасност на засилување и толеранција на инхибитор, така што PCR реакциите може да се изведат со додавање на шаблон и прајмери ​​и рехидратација на производот до 1×.Производот за PCR засилен со овој производ има истакната база „А“ на 3' крајот и може да се користи директно за ТА клонирање по прочистувањето.

Компоненти

Услови за чување

Производите треба да се чуваат на -25~-15℃ 2 години.По одмрзнувањето, Lysis Buffer може да се чува на 2~8℃ за краткорочна повеќекратна употреба и добро да се меша кога се користи.

Апликација

Овој производ е погоден за анализа на нокаут на глувчето, откривање трансген, генотипирање и така натаму.

Карактеристики

1.Едноставна операција: нема потреба од екстракција на геномска ДНК;

2.Широка примена: погоден за директно засилување на различни ткива на глувчето.

Инструкции

1.Ослободување на геномска ДНК

1) Подготовка на лизат

Лизатот на ткивата се подготвува според бројот на примероци од глувци што треба да се лизираат (лизатот на ткивото треба да се подготви на лице место според дозата и темелно да се измеша за употреба), а пропорцијата на реагенси потребни за еден примерок е како што следува:

2) Подготовка и лиза на примерок

Препорачана употреба на ткиво

Земете соодветно количество примероци од ткиво од глушец во чисти центрифугачки цевки, додадете 200 μL свеж ткивен лизат во секоја цевка од центрифугата, извиткувајте и протресете, потоа инкубирајте на 55℃ 30 минути, а потоа загрејте на 98℃ 3 минути.

3) Центрифугирање

Добро протресете го лизатот и центрифугирајте на 12.000 вртежи во минута 5 минути.Супернатантот може да се користи како шаблон за PCR засилување.Ако шаблонот е потребен за складирање, префрлете го супернатантот во друга стерилна цевка за центрифугирање и чувајте го на -20℃ 2 недели.

2.PCR засилување

Отстранете го 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix од -20℃ и одмрзнете го на мраз, измешајте наопаку и подгответе го системот за реакција на PCR според следната табела (работете на мраз):

Забелешка:

а) Додадената количина не треба да надминува 1/10 од системот, а ако се додаде премногу, PCR засилувањето може да биде инхибирана.

Препорачани услови за PCR

Забелешка:

а) Температура на жарење: Во однос на вредноста Tm на прајмерот, се препорачува температурата на жарење да се постави на помалата Tm вредност на прајмерот +3~5℃.

Заеднички проблеми и решенија

1.Нема насочени ленти

1) Прекумерен производ за лиза.Изберете ја најсоодветната количина на шаблон, обично не повеќе од 1/10 од системот;

2) Преголема големина на примерокот.Разредете го лизатот 10 пати, а потоа засилувајте, или намалете ја големината на примерокот и повторно излизајте;

3) Примероците од ткиво не се свежи.Се препорачува да се користат свежи примероци од ткиво;

4) Лош квалитет на прајмерот.Користете геномска ДНК за засилување за да го потврдите квалитетот на прајмерот и да го оптимизирате дизајнот на прајмерот.

2.Неспецифично засилување

1) Температурата на жарење е премногу ниска, а бројот на циклусот е превисок.Зголемете ја температурата на жарење и намалете го бројот на циклуси;

2) Концентрацијата на шаблонот е превисока.Намалете ја количината на шаблонот или разредете го шаблонот 10 пати по засилувањето;

3) Лоша специфичност на прајмерот.Оптимизирајте го дизајнот на прајмерот.

Белешки

1.За да се избегне вкрстена контаминација помеѓу примероците, треба да се подготват повеќе алатки за земање примероци, а површината на алатот може да се исчисти со 2% раствор на натриум хипохлорит или средство за чистење нуклеинска киселина по секое земање примероци доколку е потребна повторна употреба.

2.Се препорачува да се користат свежи марамчиња од глушец, а волуменот на земање примероци не треба да биде преголем за да се избегне влијание врз резултатите од засилувањето.

3.Lysis Buffer треба да избегнува често замрзнување-одмрзнување и може да се чува на 2~8℃ за краткорочна повеќекратна употреба.Доколку се чува на ниска температура, може да дојде до врнежи и мора целосно да се раствори пред употреба.

4.PCR Mix треба да избегнува често замрзнување-одмрзнување и може да се чува на 4℃ за краткорочна повторена употреба.

5.Овој производ е само за научни експериментални истражувања и не треба да се користи во клиничка дијагноза или третман.