Ултра нуклеаза
УлтраНуклеазата е генетски инженерски ендонуклееза добиен од Serratia marcescens, која е способна да разградува ДНК или РНК, било да е двојно или едноверижно, линеарно или кружно под широк опсег на услови, целосно да ги разградува нуклеинските киселини во 5'-монофосфатни олигонуклеотиди со должина од 3-5 бази. .По модификацијата од генетскиот инженеринг, производот беше ферментиран, изразен и прочистен во Escherichia coli (E. coli), што ја намалува вискозноста на клеточниот супернатант и клеточниот лизат на научно истражување, но исто така ја подобрува ефикасноста на прочистување и функционалното истражување на протеините.Може да се користи и во генска терапија, прочистување на вируси, производство на вакцини, фармацевтска индустрија за протеини и полисахариди како реагенс за отстранување на остатоци од нуклеинска киселина од домаќинот.
Карактеристики на производот
| CAS бр. | 9025-65-4 |
| ЕЗ бр. | |
| Молекуларна тежина | 30 kDa |
| Изоелектрична точка | 6,85 |
| Чистота на протеинот | ≥99% (SDS-PAGE и SEC-HPLC) |
| Специфична активност | ≥1.1×106 U/mg |
| Оптимална температура | 37°C |
| Оптимална pH вредност | 8.0 |
| Протеаза Активност | негативен |
| Биотовар | ＜10 CFU/100.000 U |
| Резидуален протеин од клетка домаќин | ≤10 ppm |
| Хеви метал | ≤10 ppm |
| Бактериски ендотоксин | ＜0,25EU/1000U |
| Бафер за складирање | 20mM Tris-HCl, pH 8,0, 2mM MgCl2, 20mM NaCl, 50% глицерол |
Услови за складирање
≤0°C транспорт;-25~-15°C Складирање, 2 години важност (избегнувајте замрзнување-одмрзнување).
Дефиниција на единицата
Количината на ензимот што се користи за промена на вредноста на апсорпција на △A260 за 1,0 во рок од 30 мин на 37 °C, pH 8,0, што е еквивалентно на сварената 37 μg ДНК на сперма од лосос со сечење на олигонуклеотиди, беше дефинирана како активна единица (U).
Контрола на квалитет
Резидуален протеин од клетка домаќин: комплет ELISA
•Протеаза Остатоци: 250KU/mL UltraNuclease реагираше со супстратот 60 мин, не беше откриена активност.
•Бактериски ендотоксин: LAL-Test, фармакопеја на Народна Република Кина, том 4 (издание 2020) метод за тестирање на граница на гел.Општи правила (1143).
•Биотовар: Фармакопеја на Народна Република Кина Том 4 (издание 2020) - Општо
Правила за тест за стерилитет (1101), Национален стандард на НР Кина, GB 4789.2-2016.
•Хеви метал:ICP-AES, HJ776-2015.
Операција
Активноста на UltraNuclease беше значително инхибирана кога концентрацијата на SDS беше над 0,1% или EDTA
концентрацијата беше над 1 mM. Сурфактантот Triton X-100, Tween 20 и Tween 80 немаа ефект врз нуклеазата
својства кога концентрацијата била под 1,5%.
| Операција | Оптимално работење | Валидна операција |
| Температура | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0- 11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| ДТТ | 0-100 mM | > 100 mM |
| 2-Меркаптоетанол | 0-100 mM | > 100 mM |
| Моновалентен метален јон (Na+, K+ итн.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Употреба и дозирање
• Отстранете ја егзогената нуклеинска киселина од вакцините, намалете го ризикот од токсичност на резидуалната нуклеинска киселина и подобрете ја безбедноста на производот.
• Намалете ја вискозноста на течноста за добиточна храна предизвикана од нуклеинската киселина, скратете го времето на обработка и зголемете го приносот на протеини.
• Отстранете ја нуклеинската киселина која ја обвиткала честичката (вирус, тело за инклузија, итн.), која е погодна
до ослободување и прочистување на честичката.
| Експериментален тип | Производство на протеини | Вирус, вакцина | Клеточни лекови |
| Број на ќелии | 1 g клеточна влажна тежина (ресуспендирано со 10 ml пуфер) | 1L ферментација течен супернатант | 1L култура |
| Минимална доза | 250 U | 100 U | 100 U |
| Препорачана доза | 2500 U | 25000 U | 5000 U |
• Третманот со нуклеаза може да ја подобри резолуцијата и обновувањето на примерокот за колона хроматографија, електрофореза и анализа на блотирање.
• Во генската терапија, нуклеинската киселина се отстранува за да се добијат прочистени адено-асоцирани вируси.
