BspQI
BspQI може рекомбинантно да се изрази во E. coli која може да препознае специфични места и се произведува под
BspQI, IIs рестриктивна ендонуклеаза рестриктивна ендонуклеаза, е изведен од рекомбинантен сој на E. coli кој го носи клонираниот и модифициран BspQI ген од Bacillus sphaericus.Може да препознае одредени места, а низата на препознавање и местата на расцепување се како што следува:
5' · · · · GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Карактеристики на производот
1. Висока активност, Брзо варење;
2. Ниска активност на ѕвездите, обезбедувајќи прецизно сечење како „скалпел“;
3. Без BSA и без животинско потекло;
Чувствителност на метилација
Dсум метилација:Не е чувствителен;
Dcm метилација:Не е чувствителен;
CpG метилација:Не е чувствителен;
Услови за складирање
Производот треба да се испорача ≤ 0℃;Да се чува во состојба -25~-15℃.
Бафер за складирање
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM дитиотреитол, 500 μg/ml Рекомбинантен албум, 0. 1% Trition X-100 и 50% глицерол (pH 7,0 @ 25°C).
Дефиниција на единицата
Една единица е дефинирана како количество на ензим што е потребно за да се вари 1 µg Внатрешна контрола на ДНК за 1 час на 50°C во вкупен волумен на реакција од 50 µL.
Контрола на квалитет
Анализа за чистота на протеини (SDS-PAGE):Чистотата на BspQI беше ≥95% одредена со SDS-PAGE анализа.
RNase:10 U BspQI со 1,6 μg MS2 RNA за 4 часа на 50 ℃ не дава деградација како што е утврдено со електрофореза на гел агароза.
Неспецифична активност на DNase:10 U BspQI со 1μg λ DNA на 50℃ за 16 часа, во споредба со 50℃ за 1 час, не дава вишок ДНК како што е определено со електрофореза со гел агароза.
Лигирање и ресекција:По дигестија на 1 μg λDNA со 10U BspQI, фрагментите на ДНК може да се врзат со Т4 ДНК лигаза на 16ºC.И овие лигирани фрагменти може да се отсечат со BspQI.
Ешерихија коли ДНК: E. coli 16s rDNA-специфичното детекција на TaqMan qPCR покажа дека остатоците од геномот на E.coli ≤ 0,1 pg/ul.
Остатоци од протеин од домаќинот:≤ 50 ppm
Бактериски Ендотоксин: LAL-тест, според кинеската фармакопеја IV 2020 издание, метод за тестирање на граница на гел, општо правило (1143).Содржината на бактериски ендотоксин треба да биде ≤10 EU/mg.
Систем и услови за реакција
| Компонента | Волумен |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| ДНК | 1 μg |
| 10 x BspQ I пуфер | 5 μL |
| dd H2O | До 50 μL |
Услови на реакција: 50℃, 1-16 ч.
Деактивирање на топлина: 80°C за 20 мин.
Препорачаниот систем и услови за реакција може да обезбедат релативно добар ефект на варење на ензимот, што е само за референца, ве молиме погледнете ги експерименталните резултати за детали.
Апликација за производ
Рестриктивно варење на ендонуклеазата, Брзо клонирање.
Белешки
1. Волуменот на ензимот ≤ 1/10 од волуменот на реакцијата.
2. Активноста на ѕвездите може да се појави кога концентрацијата на глицерол е повеќе од 5%.
3. Активноста на расцепување може да се појави кога Подлогата е под препорачаниот сооднос.
