Комплет CHO HCP ELISA

Во оваа анализа се користи метод на имуносорбент ELISA во еден чекор.Примероците кои содржат CHOK1 HCP истовремено реагираат со HRP-означено козјо анти-CHOK1 антитело и анти-CHOK1 антитело обложени на плочата ELISA, конечно формирајќи сендвич комплекс од антитела означени со цврста фаза на антитела-HCP.Неврзаниот антиген-антитело може да се отстрани со миење на ELISA плочата.Подлогата TMB се додава во бунарот за доволна реакција.Развојот на бојата се прекинува по додавањето на стоп-растворот, а OD или вредноста на апсорпција на реакциониот раствор на 450/650 nm се чита со читач на микроплоча.Вредноста на OD или вредноста на апсорпција е пропорционална на содржината на HCP во растворот.Од ова, концентрацијата на HCP во растворот може да се пресмета според стандардната крива.

Апликација

Овој комплет се користи за квантитативно откривање на содржината на CHOK1 протеински остатоци од клетката домаќин во примероците.

Cкомпоненти

Потребна опрема

Складирање и стабилност

1.Транспорт на -25~-15°C.

2.Условите за складирање се како што е прикажано во Табела 1;компонентите 1-2 се чуваат ≤-20°C, 5-6 се складирани RT,3,4, 7, 8 се чуваат на 2-8℃;рокот на важност е 12 месеци.

Параметри на производот

1.Чувствителност: 1ng/mL

2.Опсег на откривање: 3- 100 ng/mL

3.Прецизност: интра-анализа CV≤ 10%, интер-анализа CV≤ 15%

4.Покриеност со HCP: >80%

5.Специфичност: Овој комплет е универзален бидејќи специфично реагира со CHOK1 HCP независно од процесот на прочистување.

Подготовка на реагенс

1.PBST 0,05%

Земете 15 ml 20×PBST 0,05%, разредена во ddH₂О, и до 300 ml.

2.1,0% BSA

Земете 1 g BSA од шишето и разредете во 100 ml PBST 0,05%, добро измешајте додека целосно не се раствори и чувајте на 2-8°C.Подготвениот пуфер за разредување важи 7 дена.Се препорачува да се подготви по потреба.

3.Раствор за детекција 2μg/mL

Земете 48 μL од 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP и разредете во 11,952 μL од 1% BSA за да добиете конечна концентрација од 2 μg/mL раствор за детекција.

4.КК и подготовка на CHOK1 HCP стандарди

Табела: Подготовка на КК и стандарди 

Процедура за анализа

1.Подгответе ги реагенсите како што е наведено во „Подготовка на реагенс“ погоре.

2.Земете 50 μL стандарди, мостри и QC (види во Табела 3) во секоја бунар, а потоа додадете 100 μL раствор за откривање (2 μg/mL);Покријте ја плочата со заптивната смеса и ставете ја ELISA плочата на термомиксерот.Инкубирајте на 500 вртежи во минута, 25±3℃ 2 часа.

3.Превртете ја микроплочката во мијалникот и фрлете го растворот за обложување.Пипетирајте 300 μL PBST 0,05% во секоја бунар за да ја измиете ELISA плочата и фрлете го растворот и повторете го миењето 3 пати.Превртете ја чинијата на чиста хартиена крпа и исушете ја.

4.Додадете 100 μL TMB супстрат (види Табела 1) на секоја бунар, затворете ја ELISA плочата и инкубирајте во мрак на 25±3℃ 15 мин.

5.Пипетирајте 100 μL раствор за стоп во секоја бунар.

6.Измерете ја апсорпцијата на бранова должина од 450/650 nm со читач на микроплоча.

7.Анализирајте ги податоците со SoftMax или еквивалентен софтвер.Исцртај стандардна крива со користење на четири-параметарски логистички регресивен модел.

Пример за стандардна крива

ЗАБЕЛЕШКА: Ако концентрацијата на HCP во мострата ја надминува горната граница на стандардната крива, таа треба правилно да се разреди со пуфер за разредување пред да се тестира.

БЕЛЕШКИ

Стоп-растворот е 2M сулфурна киселина, ве молиме ракувајте внимателно за да избегнете прскање!