Multiplex qPCR Probe Premix
Бр. мачка: HCB5051A
TaqMan мултиплекс qPCR Master Mix (базиран на боја) е претходно решение за 2 × во реално време квантитативно PCR засилување кое се карактеризира со висока чувствителност и специфичност, која има сина боја и има ефект на додавање примерок.Овој производ е претходно измешан реагенс 2× Mix кој овозможува до четири флуоресцентни квантитативни PCR реакции во една бунар за реакција.Овој производ го содржи генетски модифицираниот метод на антитела за ензимот Taq со жешко стартување, што значително ја подобрува чувствителноста и специфичноста на засилувањето.Во исто време, овој производ длабоко го оптимизираше тампонот со повеќе реакции, што може да ја подобри ефикасноста на засилување на реакцијата и да промовира ефективно засилување на шаблоните со ниска концентрација.Овој производ може да се користи за генотипизација и мултиплекс квантитативна анализа.
Спецификација
| Топол почеток | Вграден топол старт |
| Метод на откривање | Откривање со прајмер-сонда |
| PCR метод | qPCR |
| Полимераза | Taq ДНК полимераза |
| Вид на примерок | ДНК |
Услови за чување
Производот се испорачува со сув мраз и може да се чува на -25~-15℃ 2 години.
Инструкции
1. РеакцијаСистем
| Компоненти | Волумен (μL) | Конечна концентрација |
| 2× TaqMan мултиплекс qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Мешавина на прајмер (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Мешавина со сонда (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox референтна боја | 0,5 | 1× |
| Шаблон ДНК/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | до 25 | - |
Белешки:Темелно измешајте пред употреба за да избегнете прекумерни меурчиња од силно тресење.
а.Концентрација на прајмер: Primer Mix содржи повеќе пара прајмери, обично секој прајмер со конечна концентрација од 0,2 μmol/L и исто така може да се прилагоди помеѓу 0,1 и 0,5 μmol/L како што е соодветно.
б.Концентрација на сонда: Mix на сонда содржи повеќе сонди со различни флуоресцентни сигнали, а концентрацијата на секоја сонда може да се прилагоди помеѓу 50 и 250 nmol/L според специфичната ситуација.
1.Референца за боја на Rox: Се користи на инструмент за засилување на PCR во реално време, како што е Applied Biosystems за да се поправи грешката на флуоресцентниот сигнал генериран помеѓу бунарите;овој производ не содржи референца за боја Rox.Cas#10200 се препорачува доколку е потребно.
2.Разредување на шаблонот: qPCR е многу чувствителен и се препорачува да се разреди шаблонот за употреба.Ако шаблонот е залихи на cDNA раствор, волуменот на шаблонот не треба да надминува 1/10 од вкупниот волумен.
3.Систем за реакција: 25μL, 30μL или 50 μL се препорачуваат за да се обезбеди ефикасност и повторливост на засилување на целниот ген.
4.Подготовка на системот: Ве молиме подгответе се во супер чистата клупа и користете ги врвовите и реакционите цевки без остатоци од нуклеаза;се препорачува да се користат врвовите со касети за филтри.Избегнувајте вкрстена контаминација и аеросол контаминација.
2.Програма за реакција
| Циклус чекор | Темп. | Време | Циклуси |
| Иницијално-денатурација | 95 ℃ | 5 мин | 1 |
| Денатурација | 95 ℃ | 15 сек | 45 |
| Греење/продолжување | 60 ℃ | 30 сек |
Белешки:
1.Греење/продолжување: Температурата и времето може соодветно да се прилагодат според дизајнираната вредност на прајмерот Tm.
2.Стекнување флуоресцентен сигнал: Времето за стекнување на флуоресцентен сигнал потребно за различни инструменти за откривање qPCR е различно, ве молиме поставете го според минималното временско ограничување.Времето на неколку вообичаени инструменти е поставено на следниов начин:
20 секунди: Применети биосистеми 7700, 7900HT, 7500 Брзи
31 сек: Применети биосистеми 7300
32 сек: Applied Biosystems 7500
Белешки
Ве молиме носете ја потребната ППЕ, како лабораториски мантил и ракавици, за да го осигурате вашето здравје и безбедност!
