Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Број на мачка: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) е мултиплекс квантитативен PCR комплет заснован на РНК како шаблон.Во процесот на експериментот, обратна транскрипција и квантитативна PCR беа спроведени во истата цевка, што ја поедностави експерименталната операција и го намали ризикот од контаминација.Во овој комплет, првата влакно cDNA беше ефикасно синтетизирана со реверзна транскриптаза отпорна на топлина и квантитативно засилена со HotStart Tag ДНК полимераза.Комплетот главно содржи оптимизиран MP пуфер, мешавина на ензими, итн. Пуферниот раствор веќе содржи Mg2+и dNTP.Дополнително, се додаваат факторите кои можат ефикасно да го инхибираат неспецифичното PCR засилување и да ја подобрат ефикасноста на засилување на повеќе qPCR реакции, што може да ја обезбеди ефикасноста на засилување и да спроведе до повеќекратна амплификација реакција.Системот dUTP/UDG е додаден за ефикасно да се спречи ризикот од контаминација на аеросол.
Компоненти
1. Тампон
2. Ензимска мешавина
Спецификација
| Топол почеток | Вграден топол старт |
| Метод на откривање | Откривање со прајмер-сонда |
| PCR метод | Еден чекор RT-qPCR |
| Полимераза | Taq ДНК полимераза |
| Вид на примерок | ДНК |
Услови за чување
Производот се испорачува со сув мраз и може да се чува на -25~-15℃ 1 година.Тоа треба да се избегне честизамрзнување-одмрзнување.Се препорачува да се зачува одделно.
Инструкции
1.Реакција Систем
| Компоненти | Волумен (μL) | Конечна концентрација |
| 2 × MP тампон | 12.5 | 1× |
| Ензимска мешавина | 1 | - |
| Мешавина за прајмер/сонда (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Шаблон РНК | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | до 25 | - |
Белешки:
Внимавајте добро да се измешате пред употреба, избегнувајте прекумерни меурчиња предизвикани од насилни вибрации.
а.Концентрација на прајмер: Мешавина на прајмер вклучувајќи мултиплекс прајмер, во зависност од ситуацијата оптималната концентрација на прајмер може да биде помеѓу 0,l и 1,0μM.
б.Концентрација на сонда: Мешавина на сонда вклучувајќи различна флуоресцентна група за означување на мултиплекс сонда, во зависност од ситуацијата оптималната концентрација на сонда може да биде помеѓу 0,05 и 0,5 μM.
в.Разредување на шаблонот: qPCR е многу чувствителен и се препорачува да се разреди шаблонот.Контролната вредност Ct е погодна помеѓу 20 и 35.
г.Подготовка на системот: Ве молиме подгответе се во ултра чиста работна маса и пипетор и реакциона цевка без остатоци од нуклеаза;се препорачува да се користи главата на пиштолот со елемент за филтер.Избегнувајте вкрстена контаминација и аеросол контаминација.
2. Оптимизирано возење велосипедПротокол
| Циклус чекор | Темп. | Време | Циклуси |
| Обратна транскрипција | 50 ℃а | 20 мин | 1 |
| Иницијално-денатурација | 95 ℃ | 5 мин | 1 |
| Реакција на засилување | 95 ℃ | 15 сек |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 сек c |
Белешки:
а.Обратна транскрипција: Температурата може да избере 42°C или 50°C.
б.Реакција на засилување: Температурата се прилагодува според вредноста на Tm на проектираните прајмери.
в.Стекнување на флуоресцентен сигнал: Поставете ја експерименталната процедура според барањата на прирачникот за инструмент.
Белешки
Ве молиме носете ја потребната ППЕ, како што се лабораториски мантил и ракавици, за да се обезбеди вашето здравје и безбедност.
