2×Sensi Direct Premix-UNG (Sonda qPCR)
Бр. мачка: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) е дизајниран да врши PCR директно од примероци без екстракција на ДНК или подготовка на примерок.Овој реагенс се состои од ДНК полимераза со топол почеток, урацил ДНК гликозилаза (UNG), инхибитор на RNase, MgCl2, dNTPs (со dUTP наместо dTTP) и стабилизатори, за квантитативна PCR (qPCR).Овој реагенс формира висока толеранција на инхибитори и на тој начин може директно да се примени за откривање на примероци како брис од грло, плунка, анти-коагулирана целосна крв, плазма и серум без екстракција на ДНК.Реагенсот користи сопствен пуфер за qPCR со мешани ензими на анти-инхибиторна ДНК полимераза и UNG ензим.Затоа, може да добие добра амплификација на целните гени во примероците што содржат инхибитори и да го инхибира лажно позитивното засилување предизвикано од резидуалното PCR и загадувањето со аеросол.Овој реагенс е компатибилен со повеќето флуоресцентни квантитативни PCR инструменти, како што се Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche и така натаму.
Компоненти
1. 50×SensiDirect ензим/УНГ Мешавина
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Услови за складирање
Сите компоненти треба да се чуваат на -20℃ за долгорочно складирање и 4℃ до 3 месеци.Ве молиме темелно измешајте по одмрзнувањето и центрифугирајте пред употреба.Избегнувајте често замрзнување-одмрзнување.
Протокол за возење велосипед
| Чекор | Температура | Време | Циклус |
| Варење | 50 ℃ | 2 мин | 1 |
| Активирање на полимераза | 95 ℃ | 1-5 мин | 1 |
| Денатурација | 95 ℃ | 10-20-ти | 40-50 |
| Греење/продолжување | 56-64℃ | 20-60-ти |
Инструкции за пипетирање
| Реагенс | Волумен по реакција | Волумен по реакција | Конечна концентрација |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12,5 µL | 25 µL | 1× |
| 50×SensiDirect Ензим/УНГ Мешавина | 0,5 µL | 1 µL | 1× |
| 25× Мешавина со прајмер-сонда1, 2 | 1 µL | 2 µL | 1× |
| Пример3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Вкупен волумен | 25 μL | 50 μL | - |
1. Конечната концентрација на прајмерот е обично 0,2μM.За подобри резултати, концентрацијата на прајмерот може да се оптимизира во опсег од 0,2-1μM.
2. Општо земено, концентрацијата на сондата може да се оптимизира во опсег од 0,1-0,3μM.Оптималната концентрација на сондата е поврзана со инструментот за засилување на PCR во реално време, типот на сондата и типот на флуоресцентна супстанција за означување.Ве молиме погледнете го прирачникот за инструмент или специфичните барања на секоја флуоресцентна сонда.
3. Различните типови на примероци содржат различни видови и содржина на инхибитор и број на копирање на целниот ген.Волуменот на примерокот треба да се земе предвид според реалната состојба.Направете разредување на примерокот со додавање вода без нуклеаза или ТЕ пуфер, доколку е потребно.
4. Препорачан волумен на различни примероци:
| Пример | Том за еден 50 μL реакција | Максимум сооднос |
| Антикоагулантна цела крв | 2,5 μL | 5% |
| Плазма | 15 μL | 30% |
| Серум | 10 μL | 20% |
| Брис од грло | 10 μL | 20% |
| Плунка | 10 μL | 20% |
Контрола на квалитет
1. Откривање на функции: чувствителност, специфичност и повторливост на qPCR.
2. Нема егзогени нуклеазни активности: нема егзогени ендонуклеази и егзонуклеазни загадувања.
Белешки за производот
1. Овој производ користи нов тип на ДНК полимераза со топол почеток, која може да се активира за 1-5 минути. Бидејќи неговиот реакциски пуфер е оптимизиран, тој е посоодветен за двојна или повеќекратна флуоресцентна квантитативна PCR со користење на методот на сонда.
2. Ако Rn вредноста на PCR засилувањето е премногу ниска или засилувањето е очигледно инхибирано, намалувањето на количината на примерокот, зголемувањето на волуменот на реакцијата или претходното разредување на примерокот може да ги подобри резултатите.
3. Собирањето крв, плунка, урина, брис од грло итн. треба да ги следи барањата на клиничките критериуми, а свеж примерок може да се користи за да се спречи деградација на нуклеинската киселина.
4. Бидејќи различните ампликони имаат различна ефикасност на искористување на dUTP и чувствителност на UNG, реагенсите треба да се оптимизираат ако чувствителноста на откривање се намали кога се користи UNG системот.Ве молиме контактирајте не за техничка поддршка доколку е потребно.
5. За да се избегне засилување на преносните PCR производи помеѓу реакциите во еден чекор, потребна е посветена експериментална област и пипета за засилување.Работете со ракавици и менувајте често и не отворајте ја реакционата цевка по PCR засилување.
