5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG
Број на мачка: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) е високо стабилна мешавина базирана на сонда со една цевка погодна за обратна транскрипција во еден чекор и квантитативна PCR (qRT-PCR).Поддржува претходно мешање на прајмери и сонди и останува стабилен по долго време складирање на ниски температури.Примерокот што треба да се тестира може да се додаде директно кога се користи, без дополнително отворање на цевката/пипетирање.Овој производ обезбедува компоненти, на пр. ДНК полимераза со топла почеток, M-MLV, урацилна ДНК гликозилаза која е отпорна на топлина (TS-UNG), инхибитор на RNase, MgCl2, dNTP (со dUTP наместо dTTP) и стабилизатори.Со генетски модифицираната брза амплификација реверзна транскриптаза и ДНК полимераза, можно е да се заврши PCR засилувањето во рок од 20-40 минути.Овој реагенс користи специјален пуфер за qPCR со мешани ензими на анти-инхибиторен ензим за засилување и UNG ензим.Затоа, може да добие добро засилување на целните гени и да спречи лажно засилување предизвикано од резидуалното PCR и загадувањето со аеросол.Овој реагенс е компатибилен со повеќето флуоресцентни квантитативни PCR инструменти од производители како Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad и Roche.
Компонента
1.25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix
2.5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)
Услови за чување
Сите компоненти треба да се чуваат на -20℃ за долгорочно складирање и 4℃ до 3 месеци.Ве молиме темелно измешајте по одмрзнувањето и центрифугирајте пред употреба.Избегнувајте често замрзнување-одмрзнување.
Подготовка на системот за реакција на qRT-PCR
| Компоненти | 25μLСистем | 50μLСистем | Конечна концентрација |
| 5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP) | 5 μL | 10 μL | 1× |
| 25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix | 1 μL | 2 μL | 1× |
| 25× Мешавина со прајмер-сондаa | 1 μL | 2 μL | 1× |
| Шаблон РНКb | - | - | - |
| ddH2O | До 25 μL | До 50 μL | - |
1) а. Конечната концентрација на прајмерот е обично 0,2μM.За подобри резултати, концентрацијата на прајмерот може да се оптимизира во опсег од 0,2-1μM.Општо земено, концентрацијата на сондата може да се оптимизира во опсег од 0,1-0,3μM.
2) б. Кога се користи брза постапка на PCR, зголемувањето на концентрацијата на прајмери и сонди може да резултира со подобри резултати од засилување, а нивниот однос треба да се оптимизира соодветно.
3) Различните типови на примероци содржат различни видови и содржина на инхибитор и број на копирање на целниот ген.Волуменот на примерокот треба да се земе предвид според реалната состојба.Направете разредување на примерокот со вода без нуклеаза или ТЕ пуфер, доколку е потребно.
Реакција Вуслови
| Редовна процедура за PCR | Брза процедура за PCR | ||||||
| Постапка | Темп. | Време | Циклус | Постапка | Темп. | Време | Циклус |
| Обратна транскрипција | 50 ℃ | 10-20 мин | 1 | Обратна транскрипција | 50 ℃ | 5 мин | 1 |
| Полимераза Активирање | 95 ℃ | 1-5 мин | 1 | Полимераза Активирање | 95 ℃ | 30-ти | 1 |
| Денатурација | 95 ℃ | 10-20-ти | 40-50 | Денатурација | 95 ℃ | 1-3 сек | 40-50 |
| Греење и Продолжување | 56-64℃ | 20-60-ти | Греење и Продолжување | 56-64℃ | 3-20-ти | ||
Контрола на квалитет
1.Откривање на функции: чувствителност, специфичност и повторливост на qPCR.
2.Нема егзогена нуклеазна активност: нема егзогена ендонуклеаза и егзонуклеаза загадување.
Белешки
1.Стапката на засилување на брзата ДНК полимераза не е помала од 1kb/10s.Различните PCR инструменти имаат различни брзини на греење и ладење, режими на контрола на температурата и топлинска спроводливост, и затоа оптимизацијата на концентрацијата на прајмер/сондата и начинот на работа во комбинација со вашиот специфичен брз PCR инструмент е од суштинско значење.
2.Овој производ има широка применливост и е погоден за молекуларна дијагноза со висока чувствителност.Методот на PCR во три чекори се препорачува за прајмери со ниска температура на жарење или за засилување на долги фрагменти над 200 bp.
3.Бидејќи различни ампликони имаат различна ефикасност на искористување на dUTP и различна чувствителност на UNG, реагенсите треба да се оптимизираат ако чувствителноста на откривање се намали кога се користи UNG системот.Ве молиме контактирајте не за техничка поддршка доколку е потребно.
4.За да се избегне засилување на преносните производи на PCR, потребна е посветена експериментална област и пипета за засилување.Работете со ракавици и менувајте често и не отворајте ја цевката за PCR по засилувањето.
