Протеиназа K mNGS (течност)
Протеиназата К е стабилна серин протеаза со широка специфичност на супстратот.Деградира многу протеини во матичната состојба дури и во присуство на детергенти.Доказите од студиите за кристална и молекуларна структура покажуваат дека ензимот припаѓа на семејството на субтилизин со каталитичка тријада на активно место (Asp39- Неговиот69- Сер224).Доминантно место на расцепување е пептидната врска во непосредна близина на карбоксилната група на алифатични и ароматични амино киселини со блокирани алфа амино групи.Најчесто се користи поради неговата широка специфичност.Оваа протеиназа К е специјално дизајнирана за mNGS.Во споредба со другата протеиназа К, таа содржи уште помалку контаминација со нуклеинска киселина со исти ензимски перформанси, што може подобро да ја обезбеди примената на mNGS низводно.
Услови за чување
2-8℃ за 2 години
Спецификација
| Изглед | Безбојна до светло кафена течност |
| Активност | ≥800 U/ml |
| Концентрација на протеини | ≥20 mg/ml |
| Никасе | Никој не е откриен |
| DNase | Никој не е откриен |
| RNase | Никој не е откриен |
Својства
| EC број | 3.4.21.64(Рекомбинант од албумот Tritirachium) |
| Изоелектрична точка | 7.81 |
| Оптимална pH вредност | 7,0- 12,0 Сл. 1 |
| Оптимална температура | 65 ℃ Сл. 2 |
| pH стабилност | pH 4,5- 12,5 (25 ℃, 16 ч.) Сл. 3 |
| Термичка стабилност | Под 50 ℃ (pH 8,0, 30 мин.) Сл. 4 |
| Стабилност на складирање | Над 90% активност за 12 месеци на 25 ℃ |
| Активатори | СДС, уреа |
| Инхибитори | Диизопропил флуорофосфат;фенилметилсулфонил флуорид |
Апликации
1. Комплет за генетска дијагностика
2. Китови за екстракција на РНК и ДНК
3. Екстракција на непротеински компоненти од ткивата, деградација на протеински нечистотии, како што е ДНКвакцини и подготовка на хепарин
4. Подготовка на хромозомска ДНК со пулсна електрофореза
5. Вестерн блот
6. Ензимски гликолизирани албумински реагенси ин витро дијагноза
Мерки на претпазливост
Носете заштитни ракавици и очила кога користите или тежите и чувајте добро проветрено по употреба.Овој производ може да предизвика алергиска реакција на кожата и сериозна иритација на очите.Ако се вдиши, може да предизвика алергија или симптоми на астма или диспнеа.Може да предизвика иритација на дишните патишта.
Дефиниција на единица
Една единица (U) е дефинирана како количина на ензим потребен за хидролизирање на казеинот за да се произведе 1 μmolтирозин во минута под следните услови.
Подготовка на реагенси
Реагенс I: 1 g млечен казеин беше растворен во 50 ml од 0,1 M раствор на натриум фосфат (pH 8,0), инкубиран во 65-70 ℃ вода 15 минути, измешан и растворен, ладен со вода, прилагоден со натриум хидроксид на pH 8,0 и фиксиран волумен. 100мл.
Реагенс II: 0.1M трихлороцетна киселина, 0.2M натриум ацетат, 0.3M оцетна киселина.
Реагенс III: 0,4M Na2CO3решение.
Реагенс IV: Реагенс форинта разреден со чиста вода 5 пати.
Реагенс V: Ензимски разредувач: 0,1 М раствор на натриум фосфат (pH 8,0).
Реагенс VI: раствор на тирозин: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml тирозин растворен со 0,2M HCl.
Постапка
1. 0,5 ml од реагенсот I е претходно загреан до 37 ° C, додадете 0,5 ml ензимски раствор, добро измешајте и инкубирајте на37℃ за 10 мин.
2. Додадете 1 ml реагенс II за да ја прекинете реакцијата, добро измешајте и продолжете со инкубацијата 30 минути.
3. Центрифугирајте го растворот за реакција.
4. Земете 0,5 ml супернатант, додадете 2,5 ml реагенс III, 0,5 ml реагенс IV, добро измешајте и инкубирајте на 37 ° Cза 30 мин.
5. ОД660е утврдена како ОД1;бланко контролна група: 0,5 ml реагенс V се користи за замена на ензимотрешение за одредување на ОД660како ОД2, ΔOD=OD1-ОД2.
6. Стандардна крива на Л-тирозин: 0,5 мл раствор на Л-тирозин различна концентрација, 2,5 мл реагенс III, 0,5 мл реагенс IV во цевче со центрифуга од 5 мл, инкубирајте во 37℃ 30 минути, откријте за OD660за различна концентрација на L-тирозин, потоа се добива стандардната крива Y=kX+b, каде што Y е концентрацијата на L-тирозин, X е OD600.
Пресметка
2: Вкупен волумен на реакциониот раствор (mL)
0,5: Волумен на ензимски раствор (mL)
0,5: Реакционен волумен на течност што се користи при хромогено определување (mL)
10: Време на реакција (мин.)
Df: Повеќекратно разредување
C: Концентрација на ензими (mg/mL)
Референци
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Биофис.Рез.Commun.(1971);44:513.
3. Хилц, Х.et al.,Евра.J. Biochem.(1975);56:103-108.
4. Сембрук Јet ал., Молекуларно клонирање: Прирачник за лабораторија, второ издание, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor (1989).
Фигури
Сл.1 Оптимално pH
100 mM пуфер раствор: pH6,0-8,0, Na-фосфат;pH8,0-9,0, Tris-HCl;pH 9,0-12,5, Glycine-NaOH. Концентрација на ензим: 1mg/mL
Сл.2 Оптимална температура
Реакција во 20 mM К-фосфат пуфер pH 8,0.Концентрација на ензими: 1 mg/mL
Сл.3 pH вредност Стабилност
25 ℃, 16 часа третман со 50 mM пуфер раствор: pH 4,5-5,5, ацетат;pH 6,0-8,0, Na-фосфат;pH 8,0-9,0, трис-HCl.pH 9,0-12,5, Глицин-NaOH.Концентрација на ензими: 1 mg/mL
Сл.4 Термички стабилност
30 мин-третман со 50 mM Tris-HCl пуфер, pH 8,0.Концентрација на ензими: 1 mg/mL
Сл.5 Складирање стабилниty at 25 ℃
