Температурно чувствителен UNG

Температурно чувствителен UNG (TS-UNG) е добиен со рекомбинантна експресија во E. coli.Ензимот го катализира ослободувањето на слободниот урацил од едно- и двоверижна ДНК што содржи урацил и е неактивен против РНК.Во споредба со конвенционалниот UNG ензим со потекло од генот E. coli, ензимот TS-UNG има поголема активност на ниски температури (20℃~37℃) и е чувствителен на температура и лесно се инактивира (50℃), избегнувајќи ја деградацијата на засилувањето што содржи dUTP производи на собна температура со резидуалната активност што може да остане по инактивацијата на конвенционалниот ензим UNG.Затоа, ензимот TS-UNG не е погоден само за реакција за спречување на контаминација со PCR, туку исто така добро се совпаѓа со програмата за засилување RT-PCR и може да се користи во реакцијата за спречување на контаминација RT-PCR.

Препорачана апликација

Засилување за спречување на контаминација

Состојба на чување

-20°C за долгорочно складирање, треба добро да се измеша пред употреба, избегнувајте често замрзнување-одмрзнување.

Бафер за складирање

20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, стабилизатор, 50% глицерол.

Дефиниција на единицата

Количината на ензимот потребна за разградување на 1 µg едноверижна ДНК која содржи dU бази за 1 час на 37°C е 1 единица активност (U).

Контрола на квалитет

1.SDS-PAGE електрофоретска чистота поголема од 98%

2.Деградациона активност, контрола од серија во серија, стабилност

3.Нема егзогена нуклеазна активност, нема егзогена ендонуклеаза или контаминација со егзонуклеаза.

Инструкции

Забелешка: а: Ако се користи за qPCR/qRT-PCR, флуоресцентната сонда треба да се додаде во системот за реакција.Обично, конечната концентрација на прајмер од 0,2 μM може да даде добри резултати;кога перформансите на реакцијата се слаби, концентрацијата на прајмерот може да се прилагоди во опсег од 0,2-1 μM.Обично, концентрацијата на сондата е оптимизирана во опсег од 0,1-0,3 μM.Може да се изведат експерименти со концентрационен градиент за да се најде најдобрата комбинација на прајмер и сонда.

Белешки

1.Оптималната температура на реакција на ензимот TS-UNG е релативно ниска и може да се оптимизира во опсег од 20℃~37℃, дозата на ензимот и времето на реакција може да се оптимизираат во опсег од 0,1~0,5 U, 5~ 10 мин;а ензимот може да се деактивира во процесот на обратна транскрипција.

2.Погоден е за PCR и RT-PCR за да се спречи контаминација.

3.Избегнувајте често замрзнување-одмрзнување и не изложувајте се на големи температурни флуктуации.

4.Различните гени што треба да се засилуваат имаат различна ефикасност на користење на dUTP и чувствителност на ензимот UNG, затоа, ако употребата на системот UNG доведе до намалување на чувствителноста на откривање, системот за реакција треба да се прилагоди и оптимизира, доколку ви треба техничка поддршка, ве молиме контактирајте нашата компанија.