Топол почеток Bst 2.0 ДНК полимераза (без глицерол)
Bst ДНК полимераза V2 е изведена од Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, која има 5'→3' ДНК полимеразна активност и силна активност за замена на синџирот, но нема 5'→3' егзонуклеазна активност.Bst DNA Polymerase V2 е идеално погодна за поместување на низата, LAMP за изотермално засилување (Изотермално засилување со посредство на јамка) и брзо секвенционирање.Bst DNA полимераза V2 е верзија со топол почеток базирана на Bst DNA полимераза V2 (HC5005A) добиена со технологија за реверзибилна модификација, која може да ја инхибира активноста на ДНК полимеразата на собна температура, така што системот за реакција може да се работи и да се формулира на собна температура за да се спречи не -специфично засилување и подобрување на ефикасноста на реакцијата, а оваа верзија може да се лиофилизира.Покрај тоа, неговата активност се ослободува при високи температури, така што нема потреба од посебен чекор за активирање.
Компоненти
| Компонента | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA полимераза V2 (без глицерол) (8U/μL) | 0,2 мл | 1 мл | 10 мл |
| 10×HC Bst V2 пуфер | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 3×10 ml |
| MgSO4(100 мм) | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 2×10 ml |
Апликации
1.LAMP изотермално засилување
2.Реакција на единечно поместување на ДНК
3.Секвенционирање на гените со висок GC
4.ДНК секвенционирање на нанограмско ниво.
Состојба на чување
Транспортирајте под 0°C и да се чува на -25°C~-15°C.
Дефиниција на единицата
Една единица е дефинирана како количина на ензим што инкорпорира 25 nmol dNTP во материјал нерастворлив во киселина за 30 минути на 65°C.
Контрола на квалитет
1.Анализа за чистота на протеини (SDS-PAGE):Чистотата на Bst ДНК полимеразата V2 е ≥99% одредена со SDS-PAGE анализа со помош на детекција на Coomassie Blue.
2.EдонуклеазаАктивност:Инкубацијата на реакција од 50 μL која содржи минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 со 1 μg λDNA во тек на 16 часа на 37 ℃ резултира со никакво детектирање на деградација како што е утврдено.
3.Егзонуклеазна активност:Инкубацијата на реакција од 50 μL која содржи минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 со 1 μg λ-Hind Ⅲ дигест ДНК за 16 часа на 37 ℃ резултира со никакво детектирање на деградација како што е утврдено.
4.Nickase Activity:Инкубацијата на реакција од 50 μL која содржи минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 со 1 μg pBR322 ДНК во тек на 16 часа на 37°C резултира со никакво детектирање на деградација како што е утврдено.
5.Активност на RNase:Инкубацијата на реакција од 50 μL која содржи минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 со 1,6 μg MS2 РНК во тек на 16 часа на 37°C не резултира со никакво детектирана деградација како што е утврдено.
6.Ешерихија колиДНК:120 U од Bst ДНК полимераза V2 се скринирани за присуство на геномска ДНК на E. coli користејќи TaqMan qPCR со прајмери специфични за локусот на E. coli 16S rRNA.Контаминацијата на геномската ДНК на E. coli е ≤1 копија.
Реакција на светилка
| Компоненти | 25μL |
| 10×HC Bst V2 пуфер | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 мм) | 1,5 μL |
| dNTP (по 10 mM секој) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Зелено (25×)a | 1,0 μL |
| Мешавина на прајмерb | 6 μL |
| Bst DNA полимераза V2 (без глицерол) (8 U/uL) | 1 μL |
| Шаблон | × μL |
| ddH2O | До 25 μL |
Белешки:
1) а.SYTOTM 16 Зелено (25×): Според експерименталните потреби, други бои може да се користат како замена;
2) б.Мешавина на прајмер: добиена со мешање на 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB и други волумени.
Реакција и состојба
1 × HC Bst V2 пуфер, температурата на инкубација е помеѓу 60°C и 65°C.
Деактивирање на топлина
80°C, 20 мин
