DNase I (Рназа без) (5u/ul)
Мачка бр: HC4007A
DNase I (Деоксирибонуклеаза I) е ендодеоксирибонуклеаза која може да вари едноверижна или двоверижна ДНК.Ги препознава и ги расцепува фосфодиестерските врски за да произведе монодеоксинуклеотиди или едно-или двоверижни олигодеоксинуклеотиди со фосфатни групи на 5'-терминалот и хидроксил на 3'-терминалот.Активноста на DNase I зависи од Ca2+а може да се активира со двовалентни метални јони како што е Mn2+и Zn2+.5 mM Ca2+го штити ензимот од хидролиза.Во присуство на Mg2+, ензимот би можел по случаен избор да препознае и расцепи кое било место на која било нишка на ДНК.Во присуство на Мн2+, двојните нишки на ДНК можат истовремено да се препознаат и да се расцепат на речиси истото место за да се формираат рамни фрагменти на ДНК или лепливи крајни фрагменти на ДНК со 1-2 нуклеотиди испакнати.
Компоненти
| Име | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, без RNase | 20 μL | 200 μL | 1 мл | 10 мл |
| 10×DNase I бафер | 1 мл | 1 мл | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Услови за складирање
-25℃~-15℃ за складирање;Транспорт под коцки мраз.
Инструкции
1. Подгответе го растворот за реакција во епрувета без RNase според пропорциите наведени подолу:
| Компонента | Волумен |
| РНК | X µg |
| 10 × DNase I бафер | 1 μL |
| DNase I, без RNase (5U/μL) | 1 U на μg RNA① |
| ddH2O | До 10 μL |
Забелешка: ① Пресметајте го волуменот на DNase I што треба да се додаде врз основа на количината на РНК.
2. 37 ℃ 15 минути;
3. Додадете 0,5M EDTA до крајната концентрација од 2,5mM~5mM и загрејте на 65℃ 10 минути за да ја прекинете реакцијата.Примерокот може директно да се користи за следната реакција како што е обратна транскрипцијаексперимент.
Дефиниција на единицата
Една единица е дефинирана како количина на ензим што целосно ќе разгради 1 μg pBR322ДНК за 10 минути на 37℃.
Контрола на квалитет
RNase:5 U DNase I со 1,6 μg MS2 РНК за 4 часа на 37℃ не дава деградација бидејќиодредено со електрофореза со гел агароза.
Белешки
1. Подгответе 0.5MEDTA сами.
2. Користете 1U DNase I на μg РНК.Меѓутоа, ако РНК е помала од 1 µg, ве молиме користете 1U DNase I.
3. Ве молиме ставете го ензимот на мраз за време на работата.
