Superstart qPCR Premix plus-UNG
Број на мачка: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG е специјализиран реагенс дизајниран за квалитативни и квантитативни реакции на PCR во реално време со помош на детекција базирана на сонда, развиен специјално за процеси на лиофилизација.Содржи нов ензим за топол почеток Hotstart Taq plus (DG), кој има ензимска активност Taq затворена на собна температура, ефикасно инхибирајќи го неспецифичното засилување предизвикано од неспецифично жарење на прајмерот или формирање на димер на прајмер при ниски температурни услови, со што се подобрува специфичноста на реакцијата на засилување.Овој реагенс користи оптимизиран qPCR специфичен тампон и UNG/dUTP систем против контаминација за да се постигне брзо загревање, што значително ја подобрува ефикасноста и чувствителноста на qPCR реакциите.Може да добие добри стандардни криви во широк опсег на квантитациони области и прецизно да изврши квантификација, ефикасно спречувајќи лажно позитивно засилување предизвикано од преостанати PCR производи или аеросол контаминација.Овој реагенс е компатибилен со повеќето флуоресцентни квантитативни PCR инструменти од производители како што се Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad и Roche итн., и покажува добра стабилност во лиофилизирана форма.
Состав на реагенс
1. 5×HotstartPremix плус-UNG (Mg2+бесплатно) (ДГ)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×лиопротектор (опционално)
Услови за чување
Долгорочно складирање на -20℃;може да се чува на 4℃ до 3 месеци.Добро измешајте пред употреба иизбегнувајте повеќекратно замрзнување и одмрзнување.
Протокол за возење велосипед
| Постапка | Темп. | Време | Циклус |
| Варење | 50 ℃ | 2 мин | 1 |
| Активирање на полимераза | 95 ℃ | 1-5 мин | 1 |
| Денатурација | 95 ℃ | 10-20 с | 40-50 |
| Греење и екстензија | 56 ~ 64 ℃ | 20-60 с | 40-50 |
qPCR Течна реакција Syстебло Подготовка
|
Состав |
25µL Волумен |
50µL Волумен |
Конечна концентрација |
| 5×HotstartPremix плус-UNG(Мг2+бесплатно) (ДГ) | 5 µL | 10 µL | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µL | 0,9 µL | 4,5 mM |
| 4×лиопротектор1 | 6,25 µL | 12,5 µL | 1× |
| 25× Мешавина со прајмер-сонда2 | 1 µL | 2 µL | 1× |
| Шаблон ДНК3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | До 25 µL | До 50 µL | —— |
1. Конечната концентрација од 0,2μM за прајмери обично дава добри резултати;кога перформансите на реакцијата се слаби, прилагодете ја концентрацијата на прајмерот во опсег од 0,2-1μM по потреба.Концентрацијата на сондата обично се оптимизира во опсег од 0,1-0,3 μM преку градиентни експерименти за да се најдат оптимални комбинации.
2. Бројот на копии на целните гени содржани во различни типови на шаблони варира;доколку е потребно, може да се изврши градиентно разредување за да се одреди оптималната количина на додавање на шаблонот.
3. Овој систем може да се лиофилизира;кога клиентите го користат овој систем без барања за сушење со замрзнување, 4×лиопротекторот може селективно да се додаде; ако има потреба од производи сушени со замрзнување, за време на валидација на перформансите на производот во фаза на течни реагенси, тој мора да додаде 4×лиопротектор за да се обезбеди конзистентност со компонентите на лиофилизираниот систем и ефекти.
Кога се користи системотг за сушење со замрзнување, подгответе го систем as следново:
| Состав | 25µL Систем за реакција |
| 5 ×HotstartPremix плус-UNG (Mg2+бесплатно) (ДГ) | 5 µL |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µL |
| 4×лиопротектор | 6,25 µL |
| 25× Мешавина со прајмер-сонда | 1 µL |
| ddH2O | До 18-20 µL |
* Доколку се потребни други системи за сушење со замрзнување, консултирајте се посебно.
Процес на лиофилизацијаss
| Постапка | Темп. | Време | Состојба | Притисок |
| Пред-замрзнување | 4℃ | 30 мин | Држете |
1 банкомат |
| -50 ℃ | 60 мин | Ладење | ||
| -50 ℃ | 180 мин | Држете | ||
| Примарно сушење | -30℃ | 60 мин | Греење |
Краен вакуум |
| -30℃ | 70 мин | Држете | ||
| Секундарно сушење | 25 ℃ | 60 мин | Греење |
Краен вакуум |
| 25 ℃ | 300 мин | Држете |
2. Горенаведениот процес на лиофилизација е само за референца.Различни типови производи и различни машини за замрзнување имаат различни параметри, така што прилагодувањата може да се направат според вистинскитеуслови за време на употреба.
3. Различни процеси на лиофилизација може да бидат погодни за различни големини на серии на лиофилизиранипроизводи, па затоа мора да се изврши доволна валидација за тестирање кога се користи за производство од големи размери.
Упатство за употреба на лиофилизирањег прашок
1. Накратко центрифугирајте го лиофилизираниот прав;
2. Додадете образец на нуклеинска киселина во лиофилизираниот прав и додадете вода до 25µL;
3. Добро се меша со центрифугирање и се работи на машина.
Контрола на квалитет:
1. Функционално тестирање: чувствителност, специфичност, репродуктивност на qPCR.
2. Нема егзогена нуклеазна активност, нема егзогена ендо/егзонуклеаза контаминација.
Техничка информација:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG користи нов ензим за топол старт кој овозможува брзо загревање во рок од 1~5 минути;преку специјална пуфер формулација е погоден за мултиплекс флуоресцентни квантитативни PCR реакции.
2. Има поголема специфичност што значително ја подобрува чувствителноста на флуоресцентното квантитативно откривање на границата на PCR, со што се нормализираат кривите на засилување, вредноста на флуоресценцијата добива очигледно подобрување при шаблони со ниска концентрација, погодни како реагенси за откривање на флуоресцентни квантитативни PCR со висока чувствителност.
3. За прајмери со пониска температура на жарење или подолги од 200bp фрагменти, се препорачува метода во 3 чекори.
4. Ефикасноста на користење на dUTP и чувствителноста на ензимот UNG се разликуваат за различни целни гени, така што ако користењето на системот UNG доведе до намалување на чувствителноста на откривање, системот за реакција треба да се прилагоди и оптимизира.Доколку е потребна техничка поддршка, ве молиме контактирајте ја нашата компанија.
5. Користете посебни области и пипети пред и по засилувањето, носете ракавици за време на работата и заменувајте ги често;не отворајте ја реакционата епрувета по завршувањето на PCR за да се минимизира контаминацијата на примероците со PCR производи.
