Еден чекор RT-qPCR SYBR Зелен премикс
Бр. мачка: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix е за квантификација на флуоресценција врз основа на бојата SYBR Green I.Користејќи генски специфични прајмери, реакциите на обратна транскрипција и qPCR се завршуваат во една епрувета, со што се елиминира потребата од повторени операции за отворање капа и пипетирање, значително подобрување на ефикасноста на анализата и намалување на ризикот од контаминација.За примероците на РНК, комплетот користи обратна транскриптаза отпорна на топлина за ефикасна синтеза на cDNA и HotStart Taq DNA полимераза за квантитативно засилување.Според оптимизираниот тампон систем, чувствителноста на комплетот може да биде висока до 0,1 pg за високо изразени цели и до 1 pg за умерено изразени цели.Комплетот е погоден за засилување и квантификација на примероци од ДНК.Овозможува чувствително откривање и квантификација на нуклеинските киселини од различни растителни и животински примероци, клетки и микроорганизми.
Компоненти
| No | Име | Волумен | Волумен |
| 1 | Напреден бафер | 250 μL | 2×1,25 мл |
| 2 | Напредна ензимска мешавина | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase Free H2O | 250 μL | 2×1,25 мл |
Услови за чување
Овој производ треба да се чува на -25~-15℃ подалеку од светлина 1 година.
Инструкции
1. Конфигурација на системот за реакцијаd
| Компоненти | Волумен (μL) | Волумен (μL) | Конечна концентрација |
| Напреден бафер | 12.5 | 25 | 1× |
| Напредна ензимска мешавина | 1 | 2 | - |
| Напреден прајмер (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Обратен прајмер (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Таблета за РНКb | X | X | - |
| RNase Free H2Оc | до 25 | до 50 | - |
Белешки:
1) а.Тконечната концентрација на прајмер беше 0,2 μmol/L, што исто така може да се прилагоди помеѓу 0,1 и 1 μmol/L како што е соодветно.
2) б.Реагенсот е исклучително чувствителен, со вкупна РНК во опсег од 1 pg-1μg, а тестирањето на човечки примероци покажа оптимален влез од 1 pg-100 ng, контролирајќи ја вкупната вредност на Ct во опсег од 15-30 како што е соодветно.
3) в.Се препорачува да се користат 20μL или 50μL за да се обезбеди валидност и репродуктивност на амплификацијата на целниот ген.
4) г.Подгответе се во ултра чистата клупа и користете врвови и реакциони цевки без остатоци од нуклеаза;се препорачуваат совети со касети за филтри.Избегнувајте вкрстена контаминација и аеросол контаминација.
2.Програма за реакција
| Циклус чекор | Темп. | Време | Циклуси |
| Обратна транскрипција | 50 ℃a | 6 мин | 1 |
| Почетна денатурација | 95 ℃ | 5 мин | 1 |
| Реакција на засилување | 95 ℃ | 15 сек | 40 |
| 60 ℃b | 30 сек | ||
| Фаза на крива на топење | Стандарди на инструменти | 1 | |
Белешки:
1) а.Температурата на обратна транскрипција може да се избере помеѓу 50-55°C според експерименталните потреби.За примероците на ДНК, процесот на обратна транскрипција може да се изостави.
2) б.Во посебни случаи, температурата на жарење/продолжување може да се прилагоди според вредноста на прајмерот Tm, се препорачуваат 60°C.
Белешки
1. Овој производ е само за истражувачка употреба.
2. Ве молиме работете со лабораториски мантили и ракавици за еднократна употреба, за ваша безбедност.
