Рнасе А
Рибонуклеазата А (RNaseA) е едноверижен полипептид кој содржи 4 дисулфидни врски со молекуларна тежина од околу 13,7 kDa.РНаза А е ендорибонуклеаза која специфично разградува едноверижна РНК на C и U остатоци.Поточно, расцепувањето ја препознава фосфодиестерската врска формирана од 5'-рибозата на нуклеотидот и фосфатната група на 3'-рибозата на соседниот пиримидински нуклеотид, така што 2, 3'-цикличните фосфати се хидролизираат до соодветните 'нуклеозидни фосфати (на пр. pG-pG-pC-pA-pG се расцепува со RNase A за да се генерираат pG-pG-pCp и A-PG).РНаза А е најактивна во расцепувањето на едноверижна РНК.Препорачана работна концентрација е 1-100μG/mL, компатибилна со различни системи за реакција.Ниска концентрација на сол (0-100 mM NaCl) може да се користи за сечење на едноверижна РНК, двоверижна РНК и РНК синџири формирани со хибридизација на РНК-ДНК.Меѓутоа, при висока концентрација на сол (≥0,3 М), РНаза А само специфично ја расцепува едноверижна РНК.
РНаза А најчесто се користи за отстранување на РНК за време на подготовката на плазмидната ДНК или геномската ДНК. Без разлика дали ДНазата е активна за време на процесот на подготовка може лесно да влијае на реакцијата.Традиционалниот метод на вриење во водена бања може да се користи за деактивирање на активноста на DNase.Овој производ не содржи DNase и протеаза и не бара термичка обработка пред употреба.Покрај тоа, овој производ може да се користи и во експерименти со молекуларна биологија, како што се анализа на заштита на RNase и анализа на секвенца на РНК.
Услови за чување
Производот може да се чува на -25-15℃, со важност 2 години.
Инструкции
Ова е еден од вообичаените методи за подготовка на раствор за складирање RNase A.Може да се подготви и оддруги методи според традиционалните методи во лабораториската или референтната литература (како на прдиректно растворање во 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 или раствор Tris-NaCl)
1. Користете 10 mM натриум ацетат (pH 5,2) за да подготвите 10 mg/mL раствор за складирање RNase A
2. Греење на 100 ℃ 15 мин
3. Изладете на собна температура, додадете 1/10 волумен од 1 M Tris-HCl (pH 7,4), прилагодете ја неговата pH вредност на 7,4 (зана пример, додадете 500 ml 10g/ml раствор за складирање на RNase 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Под-спакуван на -20℃ за замрзнато складирање, кое може да биде стабилно до 2 години.
[Забелешки]: При вриење на растворот на RNaseA во неутрални услови, ќе се формира талог на RNase;Варете го на пониска pH вредност, а доколку има врнежи, може да се забележат, што може да биде предизвикано од присуството на протеински нечистотии.Ако се најде талог по вриење, нечистотиите може да се отстранат со центрифугирање со голема брзина (13000 вртежи во минута), а потоа да се подспакува за складирање на замрзнување.
Информација за продуктот
| Синоними | Рибонуклеаза I;Рибонуклеаза на панкреасот;Рибонуклеаза 3'-пиримидноолигонуклеотидохидролаза;Rnase A;Ендорибонулаза I |
| CAS бр. | 9001-99-4 |
| Изглед | Бел лиофилизиран прав |
| Молекуларна тежина | ~ 13,7 kDa (аминокиселинска секвенца) |
| Ph вредност | 7,6 (опсег на активност 6-10) |
| Соодветна температура | 60℃ (Опсег на активност 15-70℃) |
| Активирачки агенс | Na2+.К+ |
| Инхибитор | Рназа инхибитор |
| Метод на инактивација | Не може да се деактивира со загревање, се предлага да се користи центрифуга колона |
| Потекло | Говеда |
| Растворливост | Растворлив во вода (10 mg/ml) |
| Загуба на суво | ≤5,0% |
| Ензимска активност | ≥60 Куниц единици/мг |
| Изоелектрична точка | 9.6 |
Белешки
За ваша безбедност и здравје, ве молиме носете лабораториски мантили и ракавици за еднократна употреба за работа.
