RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Овој производ содржи реакционен пуфер, RT-Enzymes Mix (Bst DNA полимераза и реверзна транскриптаза отпорна на топлина), лиофилизирани заштитни средства и компоненти на хромогени бои.За употреба, само користете пуфер, реакциониот ензим и прајмерот се мешаат и се додаваат во шаблонот;додавањето на лиофилизирано средство за заштита може да биде директно.Беше поврзан со лиофилизатор и лиофилизиран, а при употреба беа додадени само прајмерите и шаблоните.Овој комплет обезбедува брзо, јасно визуелно откривање на засилување, која негативна реакција е означена со црвено, а позитивната реакција е означена со промена во жолта.
Компонента
| Компонента | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Пуфер за засилување со посредство на јамка (со боја) | 0,96 мл | 4,80 mL×2 | 9,60 mL×10 |
| RT-Enzymes Mix | 270 μL | 2,70 мл | 2,70 mL×10 |
| Лиофилизиран заштитник | 0,96 mL×2 | 9,60 mL×2 | 9,60 mL×20 |
Апликации
За изотермално засилување на ДНК или РНК.
Услови за чување
Се транспортира со сув мраз, складиран на -25~ -15℃.Избегнувајте често замрзнување-одмрзнување, производот важи 12 месеци.
Протокол
1.Одмрзнете го реакциониот пуфер што ќе се користи на собна температура.Накратко извијте или превртете ги цевките неколку пати за да се измешаат темелно, а потоа центрифугирајте за да ја соберете течноста до дното на цевката.
2.Подготовка на систем за реакција.Овој реагенс може да се подготви во два реакциони системи, течна реакциона мешавина и лиофилизирана системска мешавина.
1) Подгответе течна реакциона смеса
| Компонента | Волумен |
| Пуфер за засилување со посредство на јамка (со боја) | 10 μL |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 μL |
| 10 × Мешавина за прајмерa | 5 μL |
| Шаблони ДНК/РНК b | × μL |
| Вода без нуклеаза | До 50 μL |
2) Мешавина на системот за лиофилизација
① Подгответе лиофилизирана смеса
| Компонента | Волумен |
| Пуфер за засилување со посредство на јамка (со боја) | 10 μL |
| Лиофилизиран заштитник | 20 μL |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 μL |
| Вода без нуклеаза | До 50 μL |
② Лиофилизација: Подготвената смеса беше лиофилизирана во систем од 50 μL
③ Подгответе реакциона мешавина
| Компонента | Волумен |
| Лиофилизирана мешавина | 1 парче |
| 10 × Мешавина за прајмерa | 5 μL |
| Шаблони ДНК/РНК b | × μL |
| Вода без нуклеаза | До 50 μL |
Белешки:
1) а.10×Микс на прајмер: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Јамка F/B;
2) б.DEPC (растворлив во вода) се препорачува за темпл на нуклеинска киселина.
1.Инкубирајте на 65°C за 30-45 минути, што може да се продолжи соодветно во зависност од промената на бојата Време на реакција.
2.Според голо око, жолтата била позитивна, а црвената негативна.
Белешки
1.Солта може да се појави на дното на тампон цевката, накратко да се извиткува или да се превртуваат цевките неколку пати за да се измешаат темелно на собна температура.
2.Температурата на реакцијата може да се оптимизира помеѓу 62 ℃ и 68 ℃ според состојбата на прајмерите.
3.Спакуваните реагенси не треба да се изложуваат на воздух долго време.
4.Црвената и жолтата реакција на обезбојување зависи од промената на pH на системот на реакција, ве молиме не користете раствор за складирање на трис нуклеинска киселина, се препорачува да се користи ddH2О складирана нуклеинска киселина;
5.Експериментот треба да се стандардизира, вклучително и подготовка на системот за реакција, лиофилизација и процес на обработка и додавање примерок;
6.За да се избегне контаминација, се препорачува да се подготви системот за реакција во ултра чиста клупа, во други Додадете шаблони на аспираторот на просторијата за да избегнете лажно позитивни пречки.
