UDG/UNG ензими
UDG (урацил ДНК гликозилаза) може да ја катализира хидролизата на N-гликозидната врска помеѓу урацилната база и шеќерно-фосфатниот столб во ssDNA и dsDNA.Лесно може да го контролира загадувањето со аеросол и е погоден за вообичаени системи за молекуларна биологија како што се PCR, qPCR, RT-qPCR и LAMP.
Спецификации
| Домаќин на изразување | Рекомбинантен E. coli со ген на урацил ДНК гликозилаза |
| Молекуларна тежина | 24. 8 kDa |
| Чистота | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Деактивирање на топлина | 95℃, 5~10 мин |
| Дефиниција на единицата | Една единица (U) е дефинирана како количина на ензим што е потребно за катализирање на хидролизата на l μg dU-содржи dsDNA за 30 минути на 25℃. |
Складирање
Производот треба да се чува на -25℃~-15°C две години.
Инструкции
1.Подготовка на смесата за реакција на PCR според следниот систем
| Компоненти | Волумен (μL) | Конечна концентрација |
| 10×PCR пуфер (Mg²+Плус) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol/Leach |
| Шаблон ДНК | X | - |
| Primer1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Прајмер 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA полимераза (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Урацил ДНК гликозилаза (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH2O | До 50 | - |
Забелешка: Според експерименталните барања, конечната концентрација на dUTP може да се прилагоди помеѓу 0,2-0,6 mmol/L, а 0,2 mmol/L dTTP може да се додава селективно.
2.Постапка за засилување
| Циклус чекор | Температура | Време | Циклуси |
| Деградација на шаблонот што содржи dU | 25 ℃ | 10 мин | 1 |
| Активирање UDG, почетна денатурација на шаблонот | 95 ℃ | 5-10 мин | 1 |
| Денатурација | 95 ℃ | 10 сек |
30-35 |
| Греење | 60 ℃ | 20 сек | |
| Продолжување | 72 ℃ | 30 секунди/кб | |
| Конечно продолжување | 72 ℃ | 5 мин | 1 |
Забелешка: Времето на реакција на 25°C може да се прилагоди во рок од 5-10 минути според експерименталните барања.
Белешки
1.UDG е активен во повеќето пуфери за PCR реакција.
2.Ензимите треба да се чуваат во кутија за мраз или на ледена бања кога се користат и треба да се чуваат на -20°C веднаш по употребата.
3.Ве молиме носете ја потребната ППЕ, како лабораториски мантил и ракавици, за да го осигурате вашето здравје и безбедност!
