Hotstart Taq DNA полимераза
Hot Start Taq DNA полимераза (модификација на антитела) е термостабилна ДНК полимераза со топол почеток од Thermus aquaticus YT-1, која поседува 5'→3' полимеразна активност и 5' ендонуклеазна активност на размавта.Так ДНК полимеразата со топол почеток е Taq ДНК полимераза која е модифицирана со термолабилни Taq антитела.Модификацијата на антителата ја зголеми специфичноста, чувствителноста и приносот на PCR.
Компоненти
| Компонента | HC1012А-01 | HC1012А-02 | HC1012А-03 | HC1012А-04 |
| 5×HC Taq тампон | 4×1 ml | 4×10 ml | 4×50 мл | 5×400 мл |
| Hot Start Taq DNA полимераза (модифицирано антитело) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 мл | 5 ml | 10×5 ml |
Апликации
10 mM Tris-HCl (pH 7,4 на 25℃), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM дитиотреитол, 0,5% Tween20, 0,5% IGEPALCA-630 и 50% глицерол.
Состојба на чување
Транспортирајте под 0°C и да се чува на -25°C~-15°C.
Дефиниција на единицата
Една единица е дефинирана како количина на ензим што инкорпорира 15 nmol dNTP во материјал нерастворлив во киселина за 30 минути на 75°C.
Контрола на квалитет
1.Endonuclease Активност:Инкубацијата на 20 U ензим со 4 μg pUC19 ДНК за 4 часа на 37 ℃ резултираше со никакво забележливо разградување на ДНК како што е утврдено со гел електрофореза.
2.5 kb Ламбда PCR:25 Циклуси на PCR засилување на 5 ng Ламбда ДНК со 1,25 единици Taq DNA полимераза во присуство на 200 µM dNTPs и 0,2 µM прајмери резултираат со очекуваниот производ од 5 kb.
3.Егзонуклеазна активност:Инкубацијата на реакција од 50 µl која содржи минимум 12,5 U Taq ДНК полимераза со 10 nmol 5´-FAM олигонуклеотид за 30 минути на 37 ℃ не дава забележлива деградација.
4.Активност на RNase:Инкубацијата на 10 µL реакција која содржи 20 U ензим со 1μg транскрипти на РНК во текот на 2 часа на 37°C резултираше со невидлива деградација на РНК како што е утврдено со гел електрофореза.
5.Деактивирање на топлина:Бр.
Систем за реакција
| Компоненти | Волумен |
| Шаблон ДНКa | изборен |
| 10 μM Напреден прајмер | 0,5 μL |
| 10 μM обратен прајмер | 0,5 μL |
| dNTP Mix (10mM секоја) | 0,5 μL |
| 5×HC Taq тампон | 5 μL |
| Taq ДНК полимеразаб(5 U/μL) | 0,125 μL |
| Вода без нуклеаза | До 25 μL |
Белешки:
1) а.
| ДНК | износ |
| Геномски | 1 ng-1 μg |
| Плазмид или вирусен | 1 стр-1 нг |
2) б.Оптималната концентрација на Taq DNA Polymerase може да се движи од 5-50 единици/mL (0,1-0,5 единици/25 µL реакција) во специјализирани апликации.
Протокол за термички циклус
PCR
| Чекор | Температура(°C) | Време | Циклуси |
| Почетна денатурацијаa | 95 ℃ | 1-3 мин | - |
| Денатурација | 95 ℃ | 15-30 с | 30-35 циклуси |
| Греењеб | 45-68 ℃ | 15-60 с | |
| Продолжување | 68 ℃ | 1 kb/min | |
| Конечно продолжување | 68 ℃ | 5 мин | - |
Белешки:
1) Почетна денатурација од 1 мин на 95°C е доволна за повеќето засилувања.За тешки шаблони, се препорачува подолго денатурација од 2-3 минути на 95°C.Со колонија PCR, се препорачува почетна денатурација од 5 минути на 95°C.
2) Чекорот на жарење е типично 15-60 секунди.Температурата на жарење се заснова на Tm на парот на прајмер и обично е 45-68℃.
