Рназа инхибитор (без глицерол)
Инхибитор на глувчешка RNase е рекомбинантен инхибитор на RNase на глувчето изразен и прочистен од E.coli.Се врзува за RNase A, B или C во сооднос 1:1 преку нековалентно поврзување, а со тоа ја инхибира активноста на трите ензими и ја штити РНК од деградација.Сепак, не е ефикасен против RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H или RNase од Aspergillus.Инхибиторот на RNase на глувчето беше тестиран со RT-PCR, RT-qPCR и IVT mRNA и беше компатибилен со различни комерцијални реверзни транскриптази, ДНК полимерази и РНК полимерази.
Во споредба со човечките инхибитори на RNase, инхибиторот на RNase на глувчето не содржи два цистеини кои се високо чувствителни на оксидација што предизвикува инактивација на инхибиторот.Тоа го прави стабилен при ниски концентрации на DTT (помалку од 1 mM).Оваа карактеристика го прави погоден за употреба во реакции каде што високите концентрации на DTT се негативни на реакцијата (на пр. RT-PCR во реално време).
Aапликација
Овој производ може широко да се користи во секој експеримент каде што е можна интерференција на RNase за да се избегне деградација на РНК, како што се:
1.Синтеза на cDNA на првата нишка, RT-PCR, RT-qPCR, итн.;
2. Заштита на РНК од деградација при ин-витро транскрипција/преведување (на пр. вирусна репликација ин витро);
3. Инхибиција на активноста на RNase за време на изолација и прочистување на РНК.
Услови за чување
Да се чува на -25-15℃;
Циклуси на замрзнување-одмрзнување ≤ 5 пати;
Валидност 1 година.
Дефиниција на единица
Една единица е дефинирана како количина на инхибитор на RNase што е потребна за да се инхибира активноста на 5 ng RNase A за 50%.
Молекуларна тежина
Инхибиторот на RNase (без глицерол) е протеин од 50 kDa.
Контрола на квалитет
Егзонуклеаза Активност:
Инкубацијата на 40 U од ензимот со 1 μg λ-Hind III дигест ДНК за 16 часа на 37°C резултираше со невидлива деградација на ДНК како што е утврдено со гел електрофореза.
Активност на ендонуклеаза:
Инкубацијата на 40 U од ензимот со 1 μg λ ДНК за 16 часа на 37°C резултираше со никакво забележливо разградување на ДНК како што е утврдено со гел електрофореза.
Никинг Активност:
Инкубацијата на 40 U од ензимот со 1 μg pBR322 за 16 часа на 37 ℃ резултираше со никакво забележливо разградување на ДНК, како што е утврдено со гел електрофореза.
RNase Активност:
Инкубацијата на 40 U ензим со 1,6 μg MS2 РНК за 4 часа на 37℃ резултираше со никакво забележливо разградување на РНК како што е утврдено со гел електрофореза.
E.coli ДНК:
40 U од ензимот се детектираат со TaqMan qPCR.ДНК на E.coli е ≤ 0. 1pg/40U.
Nотеs
1. Не тресете и не мешајте насилно за да спречите деактивирање на ензимите.
2.Рназа инхибиторот е активен на температури кои се движат од 25℃ до 55℃ и се инактивира на ≥65℃.
3. Активноста на RNase H, RNase 1 и RNase T1 не е инхибирана.
4. Опсегот на pH за инхибиција на активноста на RNase е широк (активен при pH 5-9), покажувајќи максимална активност на pH 7-8.
