Дива Так ДНК полимераза
Taq ДНК полимераза е термостабилна ДНК полимераза од Thermus aquaticus YT-1, која поседува 5'→3' полимеразна активност и 5' ендонуклеазна активност на размавта.
Компоненти
| Компонента | HC1010А-01 | HC1010А-02 | HC1010А-03 | HC1010А-04 |
| 10× Taq тампон | 2×1 мл | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 мл |
| Taq DNA полимераза (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 мл | 5 ml | 5×10 ml |
Состојба на чување
Транспортирајте под 0°C и да се чува на -25°C~-15°C.
Дефиниција на единицата
Една единица е дефинирана како количина на ензим што инкорпорира 15 nmol dNTP во материјал нерастворлив во киселина за 30 минути на 75°C.
Контрола на квалитет
1.Анализа за чистота на протеини (SDS-PAGE):Чистотата на Taq DNA полимеразата беше ≥95% одредена со SDS-PAGE анализа.
2.Endonuclease Активност:Минимум 5 U од Taq ДНК полимераза со 1 μg λDNA во текот на 16 часа на 37 ℃ резултира со никакво детектирање на деградација како што е утврдено.
3.Егзонуклеазна активност:Минимум 5 U од Taq ДНК полимераза со 1 μg λ-Hind Ⅲ дигестира ДНК за 16 часа на 37 ℃ резултира со никакво детектирање на деградација како што е утврдено.
4.Nickase Activity:Минимум 5 U од Taq ДНК полимераза со 1 μg pBR322 ДНК за 16 часа на 37°C не резултира со никакво забележливо разградување како што е утврдено.
5.Активност на RNase:Минимум 5 U од Taq ДНК полимераза со 1,6 μg MS2 РНК за 16 часа на 37°C резултира со никакво детектирање на деградација како што е утврдено.
6.Ешерихија колиДНК:5 U од Taq ДНК полимеразата се испитува за присуство на геномска ДНК на E. coli со користење на TaqMan qPCR со прајмери специфични за локусот на E. coli 16S rRNA.Контаминацијата на геномската ДНК на E. coli е ≤1 копија.
7.PCR засилување (5,0 kb Ламбда ДНК)- Реакција од 50 µL која содржи 5 ng Ламбда ДНК со 5 единици Taq DNA полимераза за 25 циклуси на PCR засилување резултира со очекуваниот производ од 5,0 kb.
Поставување реакција
| Компоненти | Волумен |
| Шаблон ДНКa | изборен |
| 10 μM Напреден прајмер | 1 μL |
| 10 μM обратен прајмер | 1 μL |
| dNTP Mix (10mM секоја) | 1 μL |
| 10×Taq бафер | 5 μL |
| Taq ДНК полимеразаб | 0,25 μL |
| Вода без нуклеаза | До 50 μL |
Белешки:
1) Оптималната реакциона концентрација на различни шаблони е различна.Следната табела ја прикажува препорачаната употреба на шаблонот на системот за реакција од 50 µL.
| ДНК | износ |
| Геномски | 1 ng-1 μg |
| Плазмид или вирусен | 1 стр-1 нг |
2) Оптималната концентрација на Taq DNA полимераза може да се движи од 0,25 µL~1 µL во специјализирани апликации.
РеакцијаПрограма
| Чекор | Температура(°C) | Време | Циклуси |
| Почетна денатурацијаa | 95 ℃ | 5 мин | - |
| Денатурација | 95 ℃ | 15-30 с | 30-35 циклуси |
| Греењеб | 60 ℃ | 15 с | |
| Продолжување | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Конечно продолжување | 72 ℃ | 5 мин | - |
Белешки:
1) Почетната состојба на денатурација е погодна за повеќето реакции на засилување и може да се менува според сложеноста на структурата на шаблонот.Ако структурата на шаблонот е сложена, времето на пред денатурација може да се продолжи на 5 – 10 минути за да се подобри почетниот ефект на денатурација.
2) Температурата на жарење треба да се прилагоди според вредноста на Tm на прајмерот, која генерално е поставена на 3~5 ℃ пониска од вредноста Tm на прајмерот;За сложени шаблони, неопходно е да се прилагоди температурата на жарење и да се продолжи времето на продолжување за да се постигне ефикасно засилување.
