Универзална SYBR GREEN qPCR Premix (сина)

Број на мачка: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Based Dye) е претходно решение за 2× во реално време квантитативно PCR засилување кое се карактеризира со висока чувствителност и специфичност, има сина боја и има ефект на следење на додавање примерок.Основната компонента Taq DNA полимераза користи топол почеток на антитела за ефикасно да го инхибира неспецифичното засилување поради варењето на прајмерот за време на подготовката на примерокот.Во исто време, формулата додава поттикнувачки фактори за подобрување на ефикасноста на засилување на PCR реакцијата и изедначување на засилувањето на гените со различна содржина на GC (30 ~ 70%), така што квантитативната PCR може да добие добра линеарна врска во широка квантитативна регион.Овој производ содржи специјална ROX пасивна референтна боја, која е применлива за повеќето qPCR инструменти.Не е потребно прилагодување на концентрацијата на ROX на различни инструменти.Потребно е само да се додадат прајмери ​​и шаблони за да се подготви системот за реакција за засилување.

Компоненти

Универзална сина qPCR Master Mix

Услови за складирање

Производот се испорачува со пакети со мраз и може да се чува на -25℃~-15℃ 18 месеци.Неопходно е да се избегне силно светлосно зрачење при складирање или подготовка на системот за реакција.

Спецификација

Инструкции

1.Систем за реакција

[Забелешка]: Темелно измешајте пред употреба за да избегнете прекумерни меурчиња од силно тресење.

а) Концентрација на прајмер: Конечната концентрација на прајмер е 0,2 μmol/L, а исто така може да се прилагоди помеѓу 0,1 и 1,0 μmol/L како што е соодветно.

б) Концентрација на шаблонот: Ако шаблонот е неразреден раствор на cDNA, употребениот волумен не треба да надминува 1/10 од вкупниот волумен на qPCR реакцијата.

в) Разредување на шаблонот: Препорачливо е да се разредува резервниот раствор на cDNA за 5-10 пати.Оптималната количина на додаден шаблон е подобра кога вредноста на Ct добиена со засилување е 20-30 циклуси.

г) Систем за реакција: Се препорачува да се користат 20μL или 50μL за да се обезбеди ефикасност и повторливост на засилување на целниот ген.

д) Подготовка на системот: Ве молиме подгответе се во супер чистата клупа и користете ги врвовите и реакционите цевки без остатоци од нуклеаза;се препорачува да се користат врвовите со касети за филтри.Избегнувајте вкрстена контаминација и аеросол контаминација.

2.Програма за реакција

Стандардна програма

Брза програма

[Забелешка]: Брзата програма е погодна за огромното мнозинство гени, а стандардните програми може да се испробаат за индивидуални сложени секундарни структурни гени.

а) Температура и време на жарење: Ве молиме прилагодете го според должината на прајмерот и целниот ген.

б) Стекнување на флуоресцентен сигнал (★): Ве молиме поставете ја експерименталната процедура според барањата во упатствата за употреба на инструментот.

в) Крива на топење: Стандардната програма на инструментот може да се користи нормално.

3. Анализа на резултати 

За квантитативни експерименти беа потребни минимум три биолошки реплики.По реакцијата, треба да се потврдат кривата на засилување и кривата на топење.

3.1 Крива на засилување:

Стандардната крива на засилување е во облик на S.Квантитативната анализа е најточна кога вредноста на Ct паѓа помеѓу 20 и 30. Ако вредноста на Ct е помала од 10, потребно е да се разреди шаблонот и повторно да се изврши тестот.Кога вредноста на Ct е помеѓу 30-35, потребно е да се зголеми концентрацијата на шаблонот или волуменот на системот за реакција, за да се подобри ефикасноста на засилување и да се обезбеди точност на анализата на резултатите.Кога вредноста на Ct е поголема од 35, резултатите од тестот не можат квантитативно да ја анализираат експресијата на генот, но може да се користат за квалитативна анализа.

3.2 Крива на топење:

Единствениот врв на кривата на топење покажува дека специфичноста на реакцијата е добра и дека може да се изврши квантитативна анализа;ако кривата на топење покажува двојни или повеќекратни врвови, не може да се изврши квантитативна анализа.Кривата на топење покажува двојни врвови и неопходно е да се процени дали нецелниот врв е прајмер димер или неспецифично засилување со електрофореза на ДНК агарозен гел.Ако се работи за димер на прајмер, се препорачува да се намали концентрацијата на прајмерот или да се редизајнираат прајмери ​​со висока ефикасност на засилување.Ако се работи за неспецифично засилување, ве молиме зголемете ја температурата на жарење или редизајнирајте ги прајмерите со специфичност.

Белешки

Ве молиме носете ја потребната ППЕ, како лабораториски мантил и ракавици, за да се обезбеди вашето здравје и безбедност!

Овој производ е САМО за истражувачка употреба!